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多克隆抗體和單克隆抗體之間的主要區(qū)別及應用

 更新時間:2022-11-21 點擊量:1237

什么是單克隆抗體?
單克隆抗體定義:
與靶抗原上的特定表位結合的一種(單一)抗體構成單克隆抗體。
單克隆抗體生產(chǎn)
為了產(chǎn)生單克隆抗體,是將免疫原注射到宿主動物中。一旦免疫原引起免疫反應,脾臟中的 B 細胞就會被提取出來并與骨髓瘤細胞(癌細胞 B 細胞)融合。
健康的脾細胞不會在細胞培養(yǎng)中無限期地存活,因此進行此融合過程以制造永生細胞系。通過該過程產(chǎn)生雜交瘤細胞系。
通過將脾臟中的單個 B 細胞融合并培養(yǎng)到它們自己的雜交瘤中,產(chǎn)生了所有產(chǎn)生相同特異性抗體的 B 細胞的單一培養(yǎng)物。
B 細胞將單克隆抗體分泌到細胞培養(yǎng)基中。在這里,它們被提取出來進行進一步的測試和純化。
單克隆抗體雜交瘤克隆的產(chǎn)生提供了穩(wěn)定的可再生抗體來源,確保每批與前一批相同。
為了產(chǎn)生一種分泌富含抗體的液體(稱為腹水)的腫瘤,也可以將雜交瘤注射到小鼠的腹腔中。
單克隆抗體的用途:

  • 檢測特定抗原

  • 檢測蛋白質家族的單個成員

  • 在實驗/批次之間創(chuàng)建一致的結果

  • 對背景較少的細胞進行染色——非常適合免疫組織化學、免疫細胞化學和免疫熒光實驗

  • 量化蛋白質表達(例如流式細胞術或熒光激活細胞分選)

  • 檢測分子構象的變化

  • 檢測磷酸化狀態(tài)的變化

  • 檢測 X 射線晶體學的目標

  • 創(chuàng)建缺少特定細胞類型的動物模型

  • 免疫療法


單克隆抗體不適用于:

  • 基于同源性檢測跨物種的靶蛋白

  • 檢測低水平的目標蛋白

  • 檢測構象改變的蛋白質


多克隆單克隆
具有不同抗原互補位的異質抗體群具有一個互補位的特異性抗體的同源群體
非表位特異性表位特異性
與相似抗原發(fā)生交叉反應的可能性增加低交叉反應性
背景噪音的可能性增加低背景噪音
批次變異性相同的批次
開發(fā)成本低開發(fā)成本高
快速生產(chǎn)(約 3 個月)生產(chǎn)緩慢(約 6 個月)
許多宿主物種選擇很少有宿主物種選擇

什么是多克隆抗體?
多克隆抗體定義:
與靶抗原上許多不同表位結合的許多(多)不同抗體構成多克隆抗體。
多克隆抗體生產(chǎn)
將免疫原注射到宿主動物體內以產(chǎn)生多克隆抗體。動物中的免疫反應是由這種免疫原激活多個 B 細胞引起的,所有這些 B 細胞都針對免疫原上的特定表位。
大量具有不同互補位的抗體由此產(chǎn)生,因此對靶蛋白的親和力不同。
 免疫后,可以直接從血清(去除凝血蛋白和紅細胞的血液)中使用這些多克隆抗體,或者將它們純化以獲得不含其他血清蛋白的溶液。
必須用抗原對新動物進行免疫以創(chuàng)建新批次,這意味著批次之間存在高度的可變性。
多克隆抗體的用途:

  • 檢測具有高抗原同源性的已知或未知抗原亞型

  • 檢測低水平的特定抗原

  • 盡可能多地捕獲抗原(例如免疫沉淀或染色質免疫沉淀)

  • 檢測變性蛋白質

  • 檢測具有可能的遺傳多態(tài)性、糖基化或構象變化的靶標

  • 跨多種檢測類型檢測天然蛋白質

  • 在不同 pH 值和鹽濃度的溶液中檢測目標


多克隆抗體不適用于以下領域:

  • 定量實驗,例如流式細胞儀,由于多個結合位點導致信號放大,會導致不正確的結果

  • 與高同源蛋白存在交叉反應問題的情況

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