一炕四女被窝交换全文阅读,老熟妇仑乱一区二区视頻,无码国内精品人妻少妇蜜桃视频,浴室高潮bd在线观看

歡迎進入蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司!
技術(shù)文章
首頁 > 技術(shù)文章 > 從微生物和細胞中中分離線粒體的基本步驟方法

從微生物和細胞中中分離線粒體的基本步驟方法

 更新時間:2023-06-09 點擊量:1451

在人體內(nèi),線粒體是我們身體的“能量中心",它們可以將營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為ATP等可用能源。除了在人體內(nèi)外動植物細胞中都能發(fā)現(xiàn)線粒體存在。通過從微生物和細胞中分離出線粒體,我們可以更好地了解其內(nèi)在機制和功能。在本文中,我們將介紹從微生物和細胞中分離線粒體的基本步驟方法。

 什么是線粒體

  自20世紀初被發(fā)現(xiàn)以來,線粒體一直被認為是細胞內(nèi)部的主要能量儲備所在。線粒體是由兩個膜界限組成的可變形的類囊體結(jié)構(gòu),在其內(nèi)側(cè)膜中包含酶群,參與三磷酸腺苷(ATP)的形成。線粒體可進一步劃分為許多結(jié)構(gòu)不同的亞種,這些亞種通過形態(tài)和功能上的區(qū)別進行分類。盡管對線粒體的研究日趨深入,但分離線粒體的技術(shù)仍然是研究員工常常需要掌握和精通的技術(shù)。

從微生物中分離線粒體的基本步驟方法

在微生物中,將細胞產(chǎn)物進行相對簡單地分離是較為容易的。關(guān)鍵的問題在于如何有效地純化線粒體并且增加其穩(wěn)定性以進行更加深入的研究。

一、所需材料

l 酵母培養(yǎng)

l 冷凍離心機

l 15 毫升離心管

l 氯化鈉 (0.9%)

l 微量移液器

l 冰冷裂解緩沖液

l 搖床

l 線粒體儲存緩沖液

l 冰箱

l 15 ml 微量離心管

二、從微生物(酵母細胞)中分離線粒體的步驟方法:

1. 將過夜酵母培養(yǎng)物無菌轉(zhuǎn)移到兩個 15ml 離心管中。

2. 在 4°C 下以 500g 離心 10 分鐘。

3. 小心去除上清液,不要干擾沉淀。

4. 使用微量移液器在 1ml 氯化鈉 (0.9%) 中小心沖洗沉淀。

5. 使用微量移液器丟棄離心管中的氯化鈉。

6. 將沉淀重懸于 1ml 冰冷的裂解緩沖液中,并使用微量移液器充分混合。

7. 在 4°C 的搖床上孵育 10 分鐘。

8. 在 4°C 下以 1000g 離心 10 分鐘,小心去除上清液。

9. 將細胞沉淀重懸于 1.5 ml 冰冷的破碎緩沖液中,并使用針頭的鈍端完成細胞破碎。

10. 將裂解物在 4°C 下以 1000g 離心 10 分鐘。

11. 將上清液轉(zhuǎn)移到新鮮的 15mL 管中,并混合從步驟 7 中獲得的上清液。

12. 在 4°C 下以 6000g 離心 10 分鐘并棄去上清液。

13. 用線粒體儲存緩沖液清洗顆粒。

14. 在 4°C 下以 6000g 離心 20 分鐘。

15. 將沉淀重懸在線粒體儲存緩沖液中并儲存在 -20°C。

細胞中分離線粒體

三、從細胞培養(yǎng)物中分離線粒體

1.所需的生物試劑/實驗試劑

l 1 升冷 STE,具有以下成分:

l 250 毫米蔗糖 = 85.58 克/升

l 5 毫米 Tris = 0.606 克/升

l 2 毫米 EGTA = 0.76 克/升

l 使用 4?C milliQ實驗室純水,pH 值至 7.4,使用 2 M HCl,置于冰上

2. 從細胞培養(yǎng)物中分離線粒體的具體方法

1. 在 3 x 500 cm2 組織培養(yǎng)板中使細胞生長至 85-95% 匯合度

2. 在生長時,吸出所有培養(yǎng)基。

3. 用 30 ml 冷 STE 清洗細胞單層,吸掉所有 STE

4. 用 30 ml 冷 STE 清洗第二次并吸出

5. 使用干凈的刀片從板表面刮下細胞單層

6. 將刮下的細胞重懸于 5 ml 冷 STE 中并轉(zhuǎn)移至離心管 (50 ml) 中。重復(fù)兩次。

7. 對所有組織培養(yǎng)板重復(fù)步驟 2-6,將細胞匯集到離心管中(每 1 個托盤 1 個管)。

8. 在 4?C 2000 rpm 下旋轉(zhuǎn)細胞 10 分鐘。

9. 小心吸出上清液(沉淀略微擴散)并保留細胞沉淀。

10. 在含有蛋白酶抑制劑和 0.5% 無脂肪酸 BSA 的 3.5 ml 冷 STE 中重懸細胞沉淀,轉(zhuǎn)移到冷的 7ml 玻璃-聚四氟乙烯勻漿器中。用 1.5 ml 含 0.5% 無脂肪酸 BSA 的 STE 洗滌試管,然后轉(zhuǎn)移至勻漿器。

11. 通過“緊密"柱塞緩慢通過 10 次使細胞勻漿,并將勻漿轉(zhuǎn)移到 50 ml 離心管中。如果需要,加滿冰冷的 STE。

12. 將勻漿在 4?C 下以 3000 rpm 的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn) 3 分鐘(1 管)

13. 通過雙層濕棉布過濾上清液,并在 4?C 下以 10000 rpm 的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn) 11 分鐘(2 管)

14. 倒出上清液并擦拭管內(nèi)壁。

15. 在冰冷的 STE 中重懸線粒體沉淀,并轉(zhuǎn)移到 15ml 離心管中。加入冰冷的 STE 并以 11,600 G 旋轉(zhuǎn) 10 分鐘。

16. 使用冷試管作為杵將線粒體顆粒重新懸浮在殘留的上清液中。

17. 將線粒體放在冰上。

       蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司14年專注生物實驗室儀器設(shè)備&耗材綜合供應(yīng),提供多能干細胞,成骨誘導分化培養(yǎng)基,骨髓干細胞、各類腫瘤細胞、臍帶血干細胞等細胞株、細胞系、細胞培養(yǎng)試劑、細胞培養(yǎng)耗材、細胞工廠、細胞培養(yǎng)瓶、細胞培養(yǎng)搖床、生物反應(yīng)器、 實驗室儀器、實驗室設(shè)備、實驗室消毒劑等上千款產(chǎn)品,品類豐富齊全,可根據(jù)您的需求,提供樣機體驗性能服務(wù)。


丝袜灬啊灬快灬高潮了AV| 日韩乱码人妻无码中文字幕久久 | 一本大道久久东京热无码av | juliaann无码丰满熟妇| 日本簧片在线观看| 国产99久久精品一区二区| 美女把尿口扒开让男人桶| 国产SUV精二区69| 久久精品AⅤ无码中文字字幕 | 欧美成人精品第一区| 麻豆国产精品va在线观看不卡| 熟妇高潮精品一区二区三区 | 无码专区人妻系列日韩精品| 黄瓜成视频人app| 亚洲永久无码7777kkk| 用舌头去添高潮无码视频| 精品国产乱码久久久久久毛片| 国产做a爱免费视频在线观看 | 狠狠色噜噜狠狠亚洲av| 被绑在打桩机上抹春药| 国产人成无码视频在线观看| 公的下面好大弄得我好爽 | 秋霞影院午夜伦a片欧美| 毛片在线播放a| 亚洲av无码乱码精品国产福利| 女人下边被添全过视频| 亚洲中文字幕无码爆乳av| 色综合99久久久无码国产精品| 性高湖久久久久久久久aaaaa| 国精产品一品二品国精破解 | 破外女13一14在线观看| av免费网站在线观看| 精品少妇人妻av无码专区偷人| 日产乱码一二三区别视频 | √天堂资源地址在线官网| 后入内射国产一区二区| 亚洲精品尤物av在线观看不卡 | 51福利国产在线观看午夜天堂| 最近2019年中文字幕完整版免费| 极品人妻偷吃40p| 欧美激情综合色综合啪啪五月|