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貼壁細(xì)胞培養(yǎng)常見的貼壁問題及解決方法

 更新時(shí)間:2023-07-13 點(diǎn)擊量:1638

貼壁細(xì)胞培養(yǎng)是一項(xiàng)常見的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),但在實(shí)際操作過程中,常常會(huì)遇到一些問題。下面將介紹貼壁細(xì)胞培養(yǎng)中常見的五大問題,并提供相應(yīng)的解決方法。

1. 傳代后部分細(xì)胞漂浮

原因及解決方法如下:

傳代前細(xì)胞密度太大:細(xì)胞融合度達(dá)到80%時(shí)可以進(jìn)行傳代操作,傳代密度需要適中,密度過高會(huì)導(dǎo)致傳代后細(xì)胞漂浮。

細(xì)胞狀態(tài)不好:可以通過提高血清比例、保持穩(wěn)定的培養(yǎng)環(huán)境等方法改善細(xì)胞狀態(tài)。

吹打次數(shù)過多造成機(jī)械損傷:在吹打過程中要輕柔操作,當(dāng)細(xì)胞呈單顆粒時(shí)可停止吹打,避免產(chǎn)生氣泡。

培養(yǎng)基更換后不適應(yīng):可以將培養(yǎng)基換回原來使用的培養(yǎng)基,或者與原培養(yǎng)基比例混合后使用,讓細(xì)胞有一個(gè)適應(yīng)期。

培養(yǎng)液配制和儲(chǔ)存不當(dāng),如pH值過堿、谷氨酰胺含量不足等原因:注意正確配制培養(yǎng)液并儲(chǔ)存好,確保培養(yǎng)液的質(zhì)量。

2. 傳代后細(xì)胞變形

原因及解決方法如下:

變形但細(xì)胞仍在生長:可能是血清批次不一樣導(dǎo)致的,建議使用同一批次的血清,若更換血清則需要與原血清混合并逐漸過渡。

變形且細(xì)胞不長且碎片增多:可能是傳代操作過程中的損傷,如消化不當(dāng)或細(xì)胞受到污染。應(yīng)根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)調(diào)整消化時(shí)間,嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作,確保細(xì)胞無外源性污染。

3. 細(xì)胞生長周期變慢,邊養(yǎng)邊漂

原因及解決方法如下:

細(xì)胞傳代時(shí)密度太稀或太密:建議在細(xì)胞融合度達(dá)到80%左右進(jìn)行傳代,傳代密度適度,密度過低會(huì)延長生長周期,密度過高會(huì)造成細(xì)胞接觸抑制。

傳代操作不當(dāng):根據(jù)細(xì)胞特性調(diào)整消化時(shí)間,觀察細(xì)胞回縮變圓并有少量細(xì)胞脫落后終止消化,頻繁換液和清洗細(xì)胞也會(huì)影響細(xì)胞狀態(tài),常規(guī)換液時(shí)間間隔為2-3天。


細(xì)胞培養(yǎng)


4. 傳代后細(xì)胞成團(tuán)

解決方法如下:

低密度接種,延長換液時(shí)間,避免細(xì)胞脫落。

使用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)器皿,增加細(xì)胞貼壁的牢固度,減少細(xì)胞聚集成團(tuán)的幾率。

重新鋪板,并更換新配制的培養(yǎng)基,增加血清的比例但不超過5%。

接種時(shí)減少培養(yǎng)基量,以加快細(xì)胞貼壁的速度,等待細(xì)胞貼壁后再補(bǔ)加培養(yǎng)基到正常用量。

5. 貼壁細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞出現(xiàn)空泡

原因及解決方法如下:

正常的細(xì)胞活動(dòng):有些細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)正常的自噬行為或其他膜泡活動(dòng),無需特殊處理。

細(xì)胞營養(yǎng)不良:可能是由血清不適應(yīng)、培養(yǎng)基成分改變或換液不及時(shí)等原因?qū)е碌?,可以通過更換適合的血清或及時(shí)換液來解決。

細(xì)胞受損:注意培養(yǎng)條件和操作手法,避免機(jī)械損傷或pH值過高或過低等情況。

通過了解這些常見的貼壁問題及解決方法,可以幫助科研人員在貼壁細(xì)胞培養(yǎng)中更好地處理各種技術(shù)難題,從而獲得高質(zhì)量的細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果。

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