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使用CD4磁珠進行細胞磁珠分選的方法

 更新時間:2024-03-05 點擊量:1089

CD4 磁珠是一種用于對細胞進行磁性標記的工具,可以有效地分離和純化CD4+細胞。該方法具有高磁珠結(jié)合力,操作簡便快捷,能夠獲得高純度、高得率和高活率的CD4+細胞。 使用CD4磁珠進行磁珠分選的方法如下:

一、樣本準備

1. 處理抗凝的外周血液: 使用密度梯度離心法分離外周血單核細胞(PBMC)。將外周血液樣本緩慢均勻地加入離心管中,疊加上相同體積的離心液。以1000g的速度離心20分鐘。將上清液去除,并輕輕將PBMC層轉(zhuǎn)移至新的離心管中。添加適量的緩沖液使得體積增加至所需的體積。

2. 處理組織: 使用標準的方法制備組織的單細胞懸浮液。先將組織切碎并轉(zhuǎn)移到含有蛋白酶等消化酶的緩沖液中。根據(jù)實驗需求,選擇合適的消化時間和溫度。消化完畢后,將組織塊過濾去除,并用緩沖液洗滌細胞沉淀。

CD4分選磁珠.png

二、磁珠標記

1. 細胞計數(shù): 使用細胞計數(shù)儀準確計算細胞數(shù)量。

2. 離心: 將細胞離心300g,離心時間為10分鐘,以去除上清液。

3. 重懸: 對于每1億細胞,使用80μL緩沖液將細胞重懸。

4. 磁珠添加: 對于每1億細胞,使用20μL的CD4磁珠將其加入細胞懸液中。輕輕混合使磁珠均勻分散。

5. 孵育: 將細胞懸液和磁珠混合物在2-8℃的環(huán)境中冰上或冰箱中孵育15分鐘。如果在冰上孵育,需要延長孵育時間。這一步驟是為了讓CD4磁珠與目標細胞結(jié)合。

6. (可選)染色抗體: 如果需要,可以加入熒光偶聯(lián)的CD4抗體。在2-8℃的環(huán)境中避光孵育5分鐘。

7. 洗滌: 對于每1億細胞,加入1-2mL緩沖液,并使用300g的速度離心10分鐘。去除上清液。

8. 細胞重懸: 使用500μL緩沖液將細胞沉淀重懸,并輕輕混合,使細胞均勻懸浮。

CD4分選磁珠.jpg

三、磁性分選

1. 放置分選柱: 將分選柱放置在分選器的磁場中。

2. 分選柱濕潤: 將適量的緩沖液加入分選柱中,充分濕潤整個分選柱的內(nèi)部表面。對于xM規(guī)格的分選柱,加入500μL緩沖液;對于xL規(guī)格的分選柱,加入3mL緩沖液。

3. 加入細胞懸液: 將細胞懸液緩慢地加入分選柱中,確保細胞均勻分布在整個分選柱中。

4. 分選: CD4+細胞與磁珠結(jié)合,被吸附在分選柱上,未標記的細胞會順著緩沖液流下來。加入適量的緩沖液,直至所有液體通過分選柱。三次洗滌,每次加入適量的緩沖液,等待液體全部流盡。

5. 收集未標記細胞: 洗滌后的流出物中包含未標記的細胞。收集這部分細胞作為未標記細胞。(對于xM規(guī)格分選柱,收集3次500μL的流出物;對于xL規(guī)格分選柱,收集3次3mL的流出物)

6. 收集目的細胞: 將分選柱從分選器中取出,并將其放在合適的收集管上。加入適量的緩沖液到分選柱中,迅速用塞子推下,收集洗脫出的磁性標記的CD4+細胞。對于xM規(guī)格分選柱,加入1mL緩沖液;對于xL規(guī)格分選柱,加入5mL緩沖液。

7. (可選)進一步富集: 為了提高標記細胞的純度,可以將洗脫的部分再次進行磁性分選。使用新的分選柱,重復(fù)步驟1至6中描述的磁性分選過程。

以上就是使用CD4磁珠進行細胞磁性分選的詳細操作步驟。請注意在操作過程中保持環(huán)境的清潔和無菌,并避免磁珠暴露在強磁場之外。

Changbai細胞分選平臺3.png


 注意事項:

1. 磁珠應(yīng)在2-8℃的條件下避光保存,不得冷凍。

2.  除了CD4磁珠,我們公司還提供SophMag®手動磁分選套裝,可以進一步提高磁分選效果。搭配使用,可以獲得較好的分選結(jié)果。

CD4磁珠是一種方便快捷、高效純化CD4+細胞的工具,適用于細胞分選和純化等實驗。無論是在科研還是臨床應(yīng)用中,都具有廣泛的應(yīng)用。需要了解更多細胞分選儀、細胞分選磁珠等相關(guān)產(chǎn)品請進入蘇州阿爾法生物實驗器材進行了解和咨詢。

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