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實(shí)驗(yàn)室常用的20種限制性內(nèi)切酶

 更新時(shí)間:2024-04-25 點(diǎn)擊量:878

在分子生物學(xué)領(lǐng)域,限制性內(nèi)切酶(Restriction Endonucleases)是一類重要的酶,能夠識別特定的DNA序列并在其特定位置切割雙鏈DNA,從而產(chǎn)生特定的DNA片段。這些酶被廣泛應(yīng)用于DNA重組、基因克隆、PCR等實(shí)驗(yàn)中。以下是20種常用的限制性內(nèi)切酶及其相關(guān)應(yīng)用介紹,以及在實(shí)驗(yàn)中需要注意的事項(xiàng)。

限制性內(nèi)切酶 AscI

 1. EcoRI

序列識別:GAATTC

應(yīng)用:常用于DNA片段的定向克隆和DNA連接實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):適宜的反應(yīng)緩沖液和適當(dāng)?shù)臏囟葘Ψ磻?yīng)效果至關(guān)重要。

 

 2. HindIII

序列識別:AAGCTT

應(yīng)用:常用于DNA片段的切割和DNA重組實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):應(yīng)注意避免酶的過度消耗和不必要的環(huán)境污染。

 

 3. BamHI

序列識別:GGATCC

應(yīng)用:常用于DNA片段的定向克隆和DNA連接實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):反應(yīng)條件的優(yōu)化對保證酶的活性和特異性至關(guān)重要。

 

 4. XhoI

序列識別:CTCGAG

應(yīng)用:常用于DNA片段的定向克隆和DNA連接實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):應(yīng)避免酶與RNA的結(jié)合,以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

 

 5. EcoRV

序列識別:GATATC

應(yīng)用:常用于DNA片段的切割和DNA重組實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):在反應(yīng)中應(yīng)嚴(yán)格控制酶的濃度,避免過度消耗。

 

 6. SalI

序列識別:GTCGAC

應(yīng)用:常用于DNA片段的定向克隆和DNA連接實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):酶的保存和使用條件對保持其活性至關(guān)重要。

 

 7. XbaI

序列識別:TCTAGA

應(yīng)用:常用于DNA片段的定向克隆和DNA連接實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):應(yīng)避免酶的不必要凍融和長時(shí)間存放。

 

 8. PstI

序列識別:CTGCAG

應(yīng)用:常用于DNA片段的切割和DNA重組實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):應(yīng)選擇適宜的反應(yīng)緩沖液,以確保酶的最佳活性。

 

 9. SmaI

序列識別:CCCGGG

應(yīng)用:常用于DNA片段的切割和DNA重組實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):酶的反應(yīng)條件需要在酶活性和DNA完整性之間取得平衡。

快速內(nèi)切酶-agei內(nèi)切酶EG23501-6

 10. NotI

序列識別:GCGGCCGC

應(yīng)用:常用于DNA片段的切割和DNA重組實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):應(yīng)避免酶與DNA的過度反應(yīng),以免影響DNA片段的完整性。

 

 11. KpnI

序列識別:GGTACC

應(yīng)用:常用于DNA片段的定向克隆和DNA連接實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):反應(yīng)體系中的離子濃度和pH值對酶的活性有重要影響,應(yīng)予以嚴(yán)格控制。

 

 12. SacI

序列識別:GAGCTC

應(yīng)用:常用于DNA片段的切割和DNA重組實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):反應(yīng)溫度和時(shí)間的選擇對酶的活性和特異性至關(guān)重要。

 

 13. SphI

序列識別:GCATGC

應(yīng)用:常用于DNA片段的切割和DNA重組實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):應(yīng)避免酶與反應(yīng)體系中的其他成分發(fā)生不必要的相互作用。

 

 14. EcoRII

序列識別:CCWGG

應(yīng)用:常用于DNA片段的切割和DNA重組實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):酶的保存和稀釋應(yīng)避免超過其最佳活性濃度。

 

 15. BglII

序列識別:AGATCT

應(yīng)用:常用于DNA片段的定向克隆和DNA連接實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):反應(yīng)體系中的酶和DNA的比例應(yīng)適當(dāng)控制,以避免浪費(fèi)和不必要的反應(yīng)。

 

 16. AvaI

序列識別:CYCGRG

應(yīng)用:常用于DNA片段的切割和DNA重組實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):反應(yīng)體系中的離子濃度和溫度需要仔細(xì)控制,以確保酶的最佳活性。

 

 17. NdeI

序列識別:CATATG

應(yīng)用:常用于DNA片段的切割和DNA重組實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):酶的保存和凍融條件對其活性和穩(wěn)定性至關(guān)重要。

快速內(nèi)切酶-agei內(nèi)切酶

 18. SstI

序列識別:GAGCTC

應(yīng)用:常用于DNA片段的切割和DNA重組實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):應(yīng)選擇適宜的反應(yīng)緩沖液和反應(yīng)溫度,以保證酶的活性和特異性。

 

 19. BstEII

序列識別:GGTNACC

應(yīng)用:常用于DNA片段的切割和DNA重組實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):反應(yīng)時(shí)間和酶的濃度需要進(jìn)行優(yōu)化,以獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

 

 20. HpaI

序列識別:GTTAAC

應(yīng)用:常用于DNA片段的切割和DNA重組實(shí)驗(yàn)中。

注意事項(xiàng):酶的穩(wěn)定性受到環(huán)境條件的影響,應(yīng)在適宜的溫度下保存和使用。

限制性內(nèi)切酶在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中很常用,其特異性識別和切割DNA序列的能力使其成為DNA重組、基因克隆和PCR等實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵工具。然而,在使用限制性內(nèi)切酶時(shí),也需要注意一些重要事項(xiàng),如優(yōu)化反應(yīng)條件、嚴(yán)格控制酶的濃度、避免酶的過度消耗和不必要的環(huán)境污染等,以確保實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蝽樌M(jìn)行并獲得可靠的結(jié)果。更多實(shí)驗(yàn)室儀器,實(shí)驗(yàn)耗材,科研試劑請進(jìn)入蘇州阿爾法生物進(jìn)行咨詢


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