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影響瓊脂糖凝膠電泳制膠的幾個因素

 更新時間:2024-04-30 點擊量:855

對于一般的分析工作,特別是定量分析工作來講,人們強調(diào)制備的凝膠要有較好的可重復(fù)性。如果制備得到的凝膠本身沒有重復(fù)性,比如孔徑前后兩次凝膠相差頗大,那么在 這樣的條件下,所得到的分析結(jié)果,其可信性就有問題,往往會使幾次結(jié)果不能重復(fù)。所以,為了要獲得可靠的分析結(jié)果,在制膠時對能影響凝膠聚合的種種因素必須加以控制。

有哪些主要因素,又怎樣來控制它們的條件,分別簡述如下:

(1) 制備凝膠用的主要試劑

(a)丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺至少是分析純級的試劑。存放時間一般不超過1年, 如果存放時間過長,丙烯酰胺受潮水解,丙烯酸含量增多。若利用它為單體,聚合時孔徑很 不均一,表現(xiàn)現(xiàn)象是聚合時間延長,甚至很難聚合,這就必須重結(jié)晶。對于定量分析工作一 般都要求對單體進行重結(jié)晶。

丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺應(yīng)放在棕色瓶中,干燥,低溫( + 4C)條件下保存。丙烯酰 胺經(jīng)陽光照射,自身會聚合成長鏈,酰胺基也會縮合形成亞胺橋,從而影響交聯(lián)結(jié)果。

配制成的貯存液,也應(yīng)盛于棕色瓶中,于+ 4 C保存,時間不超過1個月。

預(yù)制膠使用

(b)TEMED應(yīng)密封置于冰箱中貯存,使用的量應(yīng)使凝膠能在30?60分鐘內(nèi)聚合完 成,如前述不再重復(fù)。

(c)過硫酸銨應(yīng)在臨用前配制。配制好的溶液應(yīng)在冰箱中存放,使用期不超過1星 期。存放1星期后的過硫酸銨,可能仍會起作用,但不適用來作精細的分析工作。

(2)溫度

必須保持聚合溫度的恒定。聚合速度與溫度有關(guān),一般是溫度高聚合快,而聚合的快 慢影響交聯(lián)孔徑的大小,所以,必須保持恒定溫度。通常都固定在與電泳相同的溫度。凝 膠的聚合反應(yīng)是一個放熱反應(yīng),所以必須有效地散熱。一般用薄壁玻璃管在流通空氣中進 行凝膠聚合,便能達到散熱的目的°

(3)氧氣

氧是凝膠鏈合成反應(yīng)的終止劑。所以,制膠前必須充分抽氣,使02降低到一定水平 以下或者充以惰性氣體,如氧氣來降低02的含量。

(4)光照

光照的時間和強度都和凝膠的聚合速度有關(guān)。因此,必須固定光源強度、光照距離和 光照時間。

注意和控制好以上幾點,制備得到的凝膠其可重復(fù)性的程度就高。


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