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CHO細胞培養(yǎng)抗體表達工藝

 更新時間:2024-06-18 點擊量:804

在生物醫(yī)藥領域,抗體作為一種重要的治療性藥物,其研發(fā)和生產技術一直備受關注。CHO細胞因具有較大優(yōu)勢,成為生產抗體的重要平臺。本文將介紹CHO細胞培養(yǎng)抗體表達工藝,探抗體生產關鍵技術及注意事項。

一、CHO細胞培養(yǎng)抗體表達簡介

CHO細胞培養(yǎng)抗體表達工藝是指利用CHO細胞作為表達系統(tǒng),在特定條件下培養(yǎng),使細胞內抗體基因得以表達并分泌到培養(yǎng)基中。這一工藝主要包括細胞培養(yǎng)、誘導表達、收獲和純化等步驟。

二、抗體表達關鍵技術

1. 細胞培養(yǎng)

(1)選擇合適的培養(yǎng)基:CHO細胞培養(yǎng)初期采用含10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基,保證細胞生長所需營養(yǎng)。后期則選用無血清培養(yǎng)基(SFM),以避免血清污染和提高產品純度。

(2)培養(yǎng)條件:在37℃、5% CO2的條件下,確保細胞生長環(huán)境的穩(wěn)定。

2. 誘導表達

(1)選擇合適的誘導劑:根據(jù)抗體基因的特性,選擇合適的誘導劑,如異丙乙酸、氯化鈷等,以提高抗體表達水平。

(2)誘導時機:在細胞生長至對數(shù)生長期時進行誘導,有利于抗體的高效表達。

3. 收獲和純化

(1)細胞收獲:根據(jù)細胞生長曲線,選擇合適的收獲時機,以提高抗體產量。

(2)純化:采用高效液相色譜、離子交換層析等方法對收獲的抗體進行純化,去除雜質,提高產品純度。

三、CHO細胞培養(yǎng)抗體表達過程注意事項

1. 細胞株的篩選與優(yōu)化:選擇穩(wěn)定、高產的CHO細胞株,通過基因工程等手段優(yōu)化抗體基因,提高抗體表達水平。

2. 培養(yǎng)條件的優(yōu)化:根據(jù)抗體基因的特性和細胞生長曲線,調整培養(yǎng)條件,如溫度、pH、氧氣濃度等,以提高抗體產量。

3. 誘導劑的選擇與優(yōu)化:通過實驗篩選合適的誘導劑及濃度,以實現(xiàn)抗體的高效表達。

4. 避免污染:在培養(yǎng)過程中,嚴格控制無菌操作,防止外源性污染。同時,定期檢測培養(yǎng)基和設備,確保無菌狀態(tài)。

5. 監(jiān)測細胞生長與代謝:通過細胞計數(shù)、生物傳感器等技術,實時監(jiān)測細胞生長情況,及時調整培養(yǎng)條件,保證抗體生產的穩(wěn)定性。

6. 優(yōu)化純化工藝:根據(jù)抗體特性,選擇合適的純化方法,提高產品純度,降低生產成本。

細胞培養(yǎng)系統(tǒng)

    CHO細胞培養(yǎng)抗體表達工藝是一種高效生產抗體的關鍵技術。通過優(yōu)化細胞培養(yǎng)、誘導表達、收獲和純化等環(huán)節(jié),可以實現(xiàn)抗體的高產、高純度生產。在實際操作過程中,需注意細胞株篩選、培養(yǎng)條件優(yōu)化、誘導劑選擇、污染控制、細胞生長與代謝監(jiān)測及純化工藝優(yōu)化等方面,以提高抗體生產的效率和產品質量。

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