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熒光定量PCR儀的基本原理與應(yīng)用

 更新時(shí)間:2024-10-16 點(diǎn)擊量:383
  熒光定量PCR儀是一種利用熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)進(jìn)程,并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的儀器。該技術(shù)以其高靈敏度、高特異性及廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域,成為了分子生物學(xué)研究中不可缺工具。
  熒光定量PCR儀基本原理:
  熒光標(biāo)記方法:在PCR體系中加入熒光基團(tuán),如SYBR Green I染料或特定的熒光探針(如TaqMan探針),通過熒光信號(hào)的變化來實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增過程。
  Ct值計(jì)算:每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)稱為Ct值。Ct值與起始模板拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系,因此可以用來定量分析。
  定量原理:通過已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,未知樣品的起始拷貝數(shù)可以通過其Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算得出。
  熒光定量PCR儀應(yīng)用領(lǐng)域:
  基因表達(dá)研究:比較不同處理樣本或不同時(shí)間點(diǎn)特定基因的表達(dá)差異,廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究。
  病原體檢測(cè):用于檢測(cè)和定量分析病原微生物或病毒含量,如新冠病毒檢測(cè)等。
  遺傳疾病診斷:通過檢測(cè)特定的基因突變或染色體異常,輔助遺傳性疾病的診斷和產(chǎn)前診斷。
  藥物開發(fā):在新藥研發(fā)過程中,用于驗(yàn)證藥物靶點(diǎn)的有效性及藥物作用機(jī)制的研究。
  環(huán)境監(jiān)測(cè):檢測(cè)環(huán)境樣本中的微生物污染程度或特定污染物的基因標(biāo)志物。

 

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