Millicell ERS-3.0 數(shù)字細(xì)胞電阻儀在藥物研發(fā)領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，以下為您介紹一些成功案例：

一、黃諾馬苷在 MDCK 單層細(xì)胞模型上的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制分析

研究目的：研究黃諾馬苷在馬丁達(dá)比犬腎上皮（MDCK）單層細(xì)胞模型上的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)特性。

實(shí)驗(yàn)方法：利用噻唑藍(lán)（MTT）比色法考察黃諾馬苷對(duì) MDCK 細(xì)胞的毒性，使用 Millicell-ERS-2 型細(xì)胞電阻儀檢測(cè) MDCK 單層細(xì)胞模型的電阻值，考察黃諾馬苷的質(zhì)量濃度、給藥時(shí)間以及鈉 - 葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（SGLTs）抑制劑和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 2（GLUT2）抑制劑對(duì)其跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響，采用 UPLC-MS/MS 測(cè)定黃諾馬苷的含量，計(jì)算表觀滲透系數(shù)（Papp）及外排比（ER）。

研究結(jié)果：黃諾馬苷質(zhì)量濃度為 5.625 - 120mg?L-1 時(shí)對(duì) MDCK 細(xì)胞無明顯毒性作用，黃諾馬苷在 MDCK 單層細(xì)胞模型上的轉(zhuǎn)運(yùn)具有時(shí)間、濃度依賴性，且 Papp 基本處于 1×10-6 - 10×10-6cm?s-1。在 60min 和 90min 時(shí)，與空白組相比，根皮苷組中黃諾馬苷在 MDCK 單層細(xì)胞模型上的轉(zhuǎn)運(yùn)量減少。結(jié)論為黃諾馬苷在腸道中屬于中等吸收的藥物，其跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制以被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)為主，兼有主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)存在，且 SGLTs 轉(zhuǎn)運(yùn)體可能參與介導(dǎo)了黃諾馬苷在 MDCK 單層細(xì)胞模型上的轉(zhuǎn)運(yùn)。

二、血腦 / 血瘤屏障體外模型的構(gòu)建、形態(tài)與功能特性

研究目的：構(gòu)建并觀測(cè)血腦 / 血瘤屏障體外模型的形態(tài)與功能特性，為中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物跨血腦和（或）血瘤屏障研究提供體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/span>

實(shí)驗(yàn)方法：將分離的 Balb/C 小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（BMEC）在鋪有明膠的微孔膜上單層培養(yǎng)或與大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞 C6 雙室共培養(yǎng)，分別建立血腦屏障（BBB）和血瘤屏障（BTB）模型，采用光鏡和掃描電鏡觀察 BMEC 形態(tài)，采用 Millicell-ERS 系統(tǒng)檢測(cè)屏障中的跨內(nèi)皮電阻（TEERs），免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè) P - 糖蛋白（P-gp）表達(dá)，并比較 BBB 和 BTB 中 BMEC 的形態(tài)和功能特征。

研究結(jié)果：兩組模型中的 BMEC 均形成單層生長(zhǎng)和良好的細(xì)胞間緊密連接，產(chǎn)生較高的 TEERs 值，并檢測(cè)到 P-gp 表達(dá)。瘤細(xì)胞誘導(dǎo)使 BMEC 間出現(xiàn)間隙，同時(shí)相點(diǎn) TEERs 值降低，P-gp 表達(dá)減弱。結(jié)論為兩種體外模型可用于研究藥物跨血腦和（或）血瘤屏障特性，其中 BTB 模型可能更適合抗腫瘤藥物的研究。

三、腸道微生物對(duì) Caco-2 腸上皮細(xì)胞單層屏障作用的機(jī)制研究

研究目的：利用 Caco-2 腸上皮細(xì)胞單層屏障模型研究四種腸道微生物對(duì)腸道屏障的影響。

實(shí)驗(yàn)方法：建立 Caco-2 腸上皮細(xì)胞單層屏障模型，堿性磷酸酶檢測(cè)細(xì)胞極性。將實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組、大腸埃希菌組、肺炎克雷伯菌組、糞腸球菌組、乳酸桿菌組，在各組細(xì)菌作用下，Millicell-ERS 電阻測(cè)定儀測(cè)定 Caco-2 腸上皮細(xì)胞單層跨上皮細(xì)胞電阻 TEER 值變化、酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光黃通過率的變化；酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)單層細(xì)胞 zonulin；電鏡觀察細(xì)胞間緊密連接超微結(jié)構(gòu)變化；免疫熒光、Western blot 方法檢測(cè)緊密連接（TJ）相關(guān)蛋白 Occludin、Claudin-1、ZO-1 表達(dá)、分布和超微結(jié)構(gòu)變化。

研究結(jié)果：堿性磷酸酶測(cè)定細(xì)胞單層呈極性，TEER 值穩(wěn)定在 250 ㎝2，建模成功；腸道大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、糞腸球菌均引起細(xì)胞單層屏障通透性升高，TEER 值明顯下降，熒光黃透過率增高，與對(duì)照組相比較差異顯著；大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌作用后細(xì)胞釋放 zonulin 蛋白增加，與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，糞腸球菌作用于 Caco-2 細(xì)胞單層后，zonulin 釋放量較對(duì)照組升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，乳酸桿菌組 zonulin 釋放量與對(duì)照組無顯著差異；大腸埃希菌與單層細(xì)胞作用 6 小時(shí)后透射電子顯微鏡觀察單層細(xì)胞屏障可見細(xì)胞表面微絨毛變稀，絨毛有脫落，細(xì)胞間緊密連接電子密度降低，斷裂，間隙增寬；大腸埃希菌組、肺炎克雷伯菌組三種緊密連接蛋白 Occludin、Claudin-1、ZO-1 表達(dá)明顯減少。糞腸球菌組、乳酸菌組 Occludin、Claudin-1 表達(dá)與空白對(duì)照組相比無明顯變化，胞漿蛋白 ZO-1 表達(dá)降低。細(xì)菌作用 6 小時(shí)后免疫熒光觀察緊密連接蛋白分布情況，大腸埃希菌組和肺炎克雷伯菌組可見熒光較正常組松散，不連續(xù)，可見明顯鋸齒狀分布，甚至缺口及裂隙樣表現(xiàn)，熒光強(qiáng)度減弱，糞腸球菌組、乳酸菌組熒光強(qiáng)度稍減弱，但仍沿胞膜分布，條帶較清晰，與空白對(duì)照組差異不明顯。

四、烏司他丁對(duì)腸道上皮細(xì)胞屏障損傷的保護(hù)作用分析

研究目的：探討烏司他丁（UTI）對(duì)腸道上皮細(xì)胞屏障損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。

實(shí)驗(yàn)方法：培養(yǎng) Caco-2 細(xì)胞，并建立腫瘤壞死因子 α（TNF-α）誘導(dǎo)的單層上皮細(xì)胞模型，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、TNF-α 模型組、UTI 低劑量組（5 萬 U/kg）、UTI 中劑量組（10 萬 U/kg）、UTI 高劑量組（20 萬 U/kg）。采用 Millicell 電阻儀和多功能讀板儀分別測(cè)定各組上皮細(xì)胞電阻（TER）和異硫氰酸熒光素標(biāo)記的葡聚糖（FITC-dextran），酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）測(cè)定白細(xì)胞介素 6（IL-6）、IL-10 水平，流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡率，免疫蛋白質(zhì)印記（Western blot）技術(shù)測(cè)定緊密連接蛋白閉合蛋白（occludin）和緊密黏連蛋白 1（ZO-1）表達(dá)水平。

研究結(jié)果：與空白對(duì)照組相比，TNF-α 模型組 TER、FITC-dextran、occludin 和 ZO-1 表達(dá)水平均明顯下降，IL-6、IL-10、細(xì)胞凋亡率明顯升高；與 TNF-α 模型組比較，經(jīng) UTI 處理后，TER、FITC-dextran、occludin 和 ZO-1 表達(dá)水平升高，IL-6、IL-10、細(xì)胞凋亡率降低，其中以 UTI 高劑量組變化為主。

五、十溴聯(lián)苯醚對(duì)血腦屏障體外模型通透性的影響

研究目的：觀察十溴聯(lián)苯醚（BDE-209）對(duì)血腦屏障體外模型通透性的影響。

實(shí)驗(yàn)方法：利用小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 bEnd.3 與星形膠質(zhì)細(xì)胞構(gòu)建非接觸共培養(yǎng)血腦屏障體外模型，ERS 電阻儀測(cè)定跨內(nèi)皮細(xì)胞電阻值（TEER）確定建模成功，采用 CCK-8 法檢測(cè) bEnd.3 細(xì)胞活性并確定 50μmol/L 為 BDE-209 最大劑量；將 0、10、25、50μmol/L 的 BDE-209 作用于血腦屏障體外模型中的 bEnd.3 細(xì)胞 24h，采用 ERS 電阻儀測(cè)定 TEER，HRP 滲透實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)模型大分子物質(zhì)通透性，免疫印跡法檢測(cè) bEnd.3 細(xì)胞緊密連接蛋白 occludin 表達(dá)。

研究結(jié)果：隨著 BDE-209 濃度增加，TEER 逐漸下降，HRP 滲透逐漸增多，bEnd.3 細(xì)胞 occludin 蛋白表達(dá)量逐漸降低。結(jié)論為 BDE-209 可致血腦屏障體外模型 TEER 降低，HRP 滲透增高，occludin 蛋白表達(dá)減少，血腦屏障的完整性破壞。

   蘇州阿爾法生物提供Millicell ERS-3.0 數(shù)字細(xì)胞電阻儀，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)及藥物開發(fā)。了解更多實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備和試劑耗材，請(qǐng)?jiān)L問我們的網(wǎng)站。