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單層細(xì)胞系傳代培養(yǎng)指南

大多數(shù)細(xì)胞系和原代細(xì)胞培養(yǎng)物生長(zhǎng)為單一厚度的細(xì)胞層（單層）或附著在玻璃或經(jīng)過特殊處理的塑料基質(zhì)上的薄片。為了保持培養(yǎng)物的健康和積極生長(zhǎng)，通常需要定期對(duì)它們進(jìn)行傳代培養(yǎng)。常見的傳代培養(yǎng)方法涉及通過使用蛋白水解酶（如胰蛋白酶或膠原酶）破壞細(xì)胞間和細(xì)胞與基質(zhì)的連接。在細(xì)胞解離成主要由單細(xì)胞組成的懸浮液后，將它們稀釋并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)容器中。在那里它們可以重新附著并開始生長(zhǎng)和分裂，經(jīng)過一段時(shí)間的孵化后再次接近匯合。此時(shí)，它們可以再次進(jìn)行傳代培養(yǎng)或用于實(shí)驗(yàn)。以下指南描述了典型單層細(xì)胞培養(yǎng)...

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hTERT-成纖維細(xì)胞培養(yǎng)解決方案

hTERT成纖維細(xì)胞為永生化子宮內(nèi)膜成纖維細(xì)胞(THESC)具有延長(zhǎng)的壽命，并且在核型、形態(tài)和表型方面與原代親代細(xì)胞相似。在功能上，THESCs顯示激素治療后蛻膜化的生化終點(diǎn)。THESCs來源于從患有肌瘤的成年女性身上獲得的基質(zhì)細(xì)胞。原代基質(zhì)子宮內(nèi)膜細(xì)胞通過用來自包裝細(xì)胞系pA317-hTERT的上清液感染而永生化，該細(xì)胞系表達(dá)hTERT和嘌呤霉素抗性基因。hTERT成纖維細(xì)胞培養(yǎng)方案如下：一、所需材料Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基(DMEM)/F12(Sigma,D2...

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CRISPR-Cas9基因編輯實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)

在細(xì)胞上做基因研究的一般的過程就是：利用CRISPR-Cas9先做基因除(GeneKnockout)，獲得基因敲除細(xì)胞系純合細(xì)胞：然后分析相關(guān)的生物學(xué)表型；最后做為對(duì)照還需要將原敲除的基因回補(bǔ)會(huì)到原細(xì)胞系中，做為對(duì)照細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)對(duì)比。而利用Cas9進(jìn)行細(xì)胞敲除之后，細(xì)胞回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)室要注意哪些問題?特別需要考慮的技術(shù)原理是那些？如何規(guī)劃好實(shí)驗(yàn)流程，下面我們就一步步的進(jìn)一下細(xì)胞其因敲除和回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)的效率/價(jià)格/周期等。一、敲除細(xì)胞的方式一般都是純合基因敲除細(xì)胞，當(dāng)然也可以選擇MixC...

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細(xì)胞培養(yǎng)基pH值對(duì)細(xì)胞的影響

細(xì)胞培養(yǎng)基pH值對(duì)細(xì)胞的影響培養(yǎng)基是用來供給細(xì)胞營養(yǎng)，促使細(xì)胞增殖的，也是細(xì)胞賴以生長(zhǎng)的環(huán)境。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中用量最多的就是細(xì)胞培養(yǎng)基，雖然細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)基本技術(shù)大同小異，但是每種細(xì)胞的培養(yǎng)條件卻相差甚遠(yuǎn)。若偏離某種細(xì)胞所需的培養(yǎng)條件，則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞表達(dá)不同的表型。一、培養(yǎng)基體系主要成分及功能介紹1、葡萄糖：用于細(xì)胞能量代謝。2、CO?：細(xì)胞需要少量的二氧化碳來維持生長(zhǎng)。在培養(yǎng)基中，溶解的CO?與碳酸氫鹽離子處于平衡狀態(tài)，許多培養(yǎng)基利用了這種CO?/碳酸氫鹽反應(yīng)來緩沖培養(yǎng)基的pH值...

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菌種保存常用的五種方法

各種微生物由于遺傳特性不同，因此適合采用的保藏方法也不一樣。一種良好的有效保藏方法，首先應(yīng)能保持原菌種的優(yōu)良性狀長(zhǎng)期不變，同時(shí)還須考慮方法的通用性、操作的簡(jiǎn)便性和設(shè)備的普及性。下面介紹幾種常用的菌種保藏方法：1.斜面低溫保藏法將菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上，待菌種生長(zhǎng)完成后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定時(shí)間（保藏期）再轉(zhuǎn)接至新的斜面培養(yǎng)基上，生長(zhǎng)后繼續(xù)保藏，如此連續(xù)不斷。此法廣泛適用于細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌等大多數(shù)微生物菌種的短期保藏及不宜用冷凍干燥保藏的菌種。放線...

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