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PCR反應(yīng)的基本原理與實(shí)驗(yàn)技術(shù)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆誔CR反應(yīng)的基本原理與實(shí)驗(yàn)技術(shù)二、PCR反應(yīng)實(shí)驗(yàn)原理PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，可以選擇性擴(kuò)增一段DNA序列。其基本步驟是，首先將待擴(kuò)增的模板DNA變性使之成為單鏈，DNA樣品中，特異性的引物能夠與其互補(bǔ)的序列雜交，在dNTPs和Taq酶存在時(shí)，就可以合成模板DNA的互補(bǔ)鏈，反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物加熱使DNA雙鏈變性，溫度下降后，過(guò)量的引物又可以開(kāi)始第二輪的合成反應(yīng)。這種延伸-變性-退火-延伸的循環(huán)可以重復(fù)多次...

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瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA的方法

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^(guò)本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA的方法和技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)原理DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。DNA分子在高于等電點(diǎn)的pH溶液中帶負(fù)電荷在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。由于糖－磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì)，相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此他們能以相同的速度向正極方向移動(dòng)。在一定的電場(chǎng)強(qiáng)度下，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應(yīng)，即DNA分子本身的大小和構(gòu)型。具有不同的相對(duì)分子質(zhì)量的DNA片段泳動(dòng)速度不一樣，可進(jìn)行分離。DNA分子的遷移速度...

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病毒純化方法

病毒是一類(lèi)非細(xì)胞型生物，需要寄生在其活細(xì)胞體內(nèi)，雖然大部分病毒對(duì)人體是有害的，但是隨著科學(xué)的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)很多病毒有較高的利用價(jià)值。例如：可以作為基因工程載體的慢病毒、腺相關(guān)病毒等；還有噬菌體展示技術(shù)，可以幫助我們對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行相關(guān)研究；以及曾作為細(xì)胞融合應(yīng)用的仙臺(tái)病毒；而病毒最重要的應(yīng)用，就是用來(lái)制備滅活、減毒、亞單位疫苗。本期，我們主要對(duì)病毒疫苗生產(chǎn)過(guò)程中的純化方法進(jìn)行介紹。病毒提純是病毒學(xué)研究的重要前提，病毒的相關(guān)詳細(xì)研究都需要高純度的病毒樣品。病毒純化是在病毒不受損、不失活...

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分光光度計(jì)選購(gòu)指南

光譜儀或分光光度計(jì)是用于識(shí)別或確認(rèn)樣品中物質(zhì)的化學(xué)種類(lèi)、化學(xué)結(jié)構(gòu)或濃度的分析儀器。分光光度計(jì)將發(fā)射能量源通過(guò)溶液并測(cè)量不同波長(zhǎng)的光強(qiáng)度。若溶液的分子濃度較高，則可能會(huì)吸收更多的光。所以，提交用于光譜分析的樣品必須非常純凈，以避免產(chǎn)生不良或受污染的結(jié)果。分光光度計(jì)主要由激發(fā)光源、濾光片、比色皿，以及光信號(hào)檢測(cè)器所組成。選擇合適的分光光度計(jì)/光譜儀時(shí)要考慮的重要標(biāo)準(zhǔn)：檢測(cè)限制您要測(cè)量的產(chǎn)品的密度、形狀或尺寸波長(zhǎng)范圍分析工作范圍樣品通量（單樣品與多樣品）數(shù)據(jù)質(zhì)量?jī)x器和相關(guān)消耗品的成...

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動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器中乳酸含量的控制方法

銨產(chǎn)量過(guò)多、乳酸產(chǎn)量過(guò)剩、營(yíng)養(yǎng)限制或與營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)給、添加堿以控制pH值相關(guān)的高滲應(yīng)激等因素，使得動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器中的細(xì)胞密度被限制。為了部分克服這些因素，使用乳酸補(bǔ)充和適應(yīng)LSA技術(shù)是減少銨和乳酸產(chǎn)生的一種簡(jiǎn)單方法。使用這種簡(jiǎn)單的方法，可以實(shí)現(xiàn)了將近乳酸產(chǎn)量的大幅度減少，同時(shí)在分批搖瓶培養(yǎng)中減少了50%的銨產(chǎn)量。在隨后的補(bǔ)料分批生物反應(yīng)器培養(yǎng)中，使用BiosenC-Line乳酸分析儀測(cè)定乳酸產(chǎn)量減少了近8八倍。甚至可以實(shí)現(xiàn)3500萬(wàn)個(gè)細(xì)胞/mL的活細(xì)胞密度和2.73億個(gè)細(xì)胞...

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