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細(xì)胞培養(yǎng)前的滅菌處理技術(shù)

無論從事何種細(xì)胞培養(yǎng)，無菌技術(shù)都是絕對最重要的部分。細(xì)胞培養(yǎng)前的無菌處理技術(shù)分為三部分即：①工作環(huán)境及表面的處理；②細(xì)胞培養(yǎng)所用玻璃及塑料制品的處理；③實(shí)驗(yàn)者的操作技術(shù)；還有哺乳動(dòng)物細(xì)胞的處理及維持細(xì)胞生長所需要的培養(yǎng)液的無菌處理。1.工作環(huán)境的無菌處理在細(xì)胞培養(yǎng)早期，研究者可以依靠操作技術(shù)和盡可能地靠近火焰以達(dá)到細(xì)胞的無菌化，隨著工作環(huán)境的機(jī)械學(xué)發(fā)展，其無菌化程度已得到大大提高，免去了實(shí)驗(yàn)者手指被燒灼的痛苦。層流超凈臺(tái)是使工作臺(tái)無菌化有效的手段，組織培養(yǎng)可在相對密閉而幾乎無...

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懸浮細(xì)胞的電融合轉(zhuǎn)染技術(shù)簡介

懸浮細(xì)胞的電融合轉(zhuǎn)染技術(shù)融合懸浮細(xì)胞的步驟與電穿孔的很類似，只是在進(jìn)行高強(qiáng)度的電場脈沖前后，必須用低幅、高頻電場使細(xì)胞排成一條鏈。1用融合介質(zhì)（FM）洗懸浮細(xì)胞兩次，然后懸于FM中。洗滌細(xì)胞時(shí)，在臺(tái)式離心機(jī)上1000rpm下離心3分鐘，得到細(xì)胞沉淀，棄去上清液將細(xì)胞懸于新鮮FM介質(zhì)中。2將懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)移到相應(yīng)的融合室內(nèi)。假如要使兩種不同的細(xì)胞彼此融合，轉(zhuǎn)移前要充分混合。3啟動(dòng)介電電泳場，其振幅通常小于200V/cm，頻率在2MHz以內(nèi)，用顯微鏡檢測細(xì)胞是否排成一條鏈，調(diào)節(jié)振幅和...

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發(fā)酵罐中微生物生長特性及其在發(fā)酵工業(yè)中的應(yīng)用

微生物是發(fā)酵工業(yè)的靈魂，對微生物控制的發(fā)酵過程進(jìn)行優(yōu)化，我們要了解發(fā)酵罐中微生物的生長反應(yīng)特性。微生物細(xì)胞生長是細(xì)胞個(gè)體內(nèi)許多化學(xué)反應(yīng)的綜合結(jié)果。這些反應(yīng)包括合成提供其它反應(yīng)需要的吉布斯自由能；利用底物合成結(jié)構(gòu)單元，再聚合成大分子物質(zhì)，供合成細(xì)胞所需等。正常情況下，微生物細(xì)胞為了確保有序和高效生長，必須將這些反應(yīng)有機(jī)地結(jié)合在一起，經(jīng)濟(jì)地分配胞內(nèi)各代謝途徑的通量。大腸桿菌是發(fā)酵研究中用得最多的微生物。在大腸桿菌生長過程中前人已觀察到下列現(xiàn)象∶(1)在大腸桿菌快速生長期間，生物合...

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懸浮細(xì)胞電穿孔轉(zhuǎn)染法的實(shí)驗(yàn)流程詳解

[實(shí)驗(yàn)原理]當(dāng)細(xì)胞置于非常高的電場中，細(xì)胞膜就變得具有通透性，能讓外界的分子擴(kuò)散進(jìn)細(xì)胞內(nèi)，這一現(xiàn)象稱為電穿孔。運(yùn)用這一技術(shù)，許多物質(zhì)，包括DNA、RNA、蛋白質(zhì)、藥物、抗體和熒光探針都能載入細(xì)胞。作為一種基因轉(zhuǎn)導(dǎo)方法，電穿孔已被廣泛用于各種細(xì)胞類型，包括細(xì)菌、酵母、植物和動(dòng)物細(xì)胞；而且，它還能作為注射方法（稱為電注射），把各種外源物質(zhì)引入活細(xì)胞。與其他常用的導(dǎo)入外源物質(zhì)的方法相比，電穿孔具有很多優(yōu)點(diǎn)。一.不必象顯微鏡那樣使用玻璃針，不需要技術(shù)培訓(xùn)和昂貴的設(shè)備，可以一次對成百萬...

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內(nèi)毒素去除方法有哪些

內(nèi)毒素去除方法概述內(nèi)毒素是存在于革蘭氏陰性細(xì)菌外膜中的致病因子，具有較好的耐熱性和穩(wěn)定性，對人體健康有著不可忽視的危害。本文將概述內(nèi)毒素的成分和特性，并討論了目前常見的內(nèi)毒素去除方法包括超濾去除法、活性炭法、表面活性劑萃取、強(qiáng)酸強(qiáng)堿、層析法等。同時(shí)還分析了各種方法的優(yōu)缺點(diǎn)以及在工業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用前景。一、超濾去除法和活性炭法內(nèi)毒素由多糖O抗原、核心多糖和類脂A等組成，作為細(xì)菌外膜的主要結(jié)構(gòu)成分，不易被化學(xué)藥品破壞。為了有效去除內(nèi)毒素，可以采用多種方法。超濾去除法通過使用孔徑適當(dāng)...

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